Molinari R.

Selenium inhibits apoptosis and GSH extrusion induced by DHA in human Paca-44 cell lines

Rivista : Anno 42/Numero 4

Scopo dello studio. Considerando che le possibili interazioni tra selenio (Se) e acido docosaesaenoico (DHA) nel regolare le varie risposte fisiopatologiche nelle cellule cancerose non sono state pienamente definite, lo scopo di questo lavoro è stato quello di indagare gli effetti del co-trattamento del DHA con il Se su: stato redox cellulare, apoptosi e contenuto di glutatione nella linea cellulare umana Paca-44 di carcinoma pancreatico.
Metodi. Le cellule sono state trattate con DHA o acido arachidonico (ARA), da soli o in combinazione con sodio selenito (Na2SeO3). Dopo i trattamenti, la vitalità e la crescita cellulare sono stati analizzati attraverso il test del trypan blue e i livelli di apoptosi sono stati valutati usando il test dell’annessina V/FITC. Lo stato ossidativo cellulare è stato analizzato misurando i livelli delle ROS attraverso la sonda permeabile 2’,7’-diclorofluoresceina diacetato (DCFH-DA), l’attività della glutatione perossidasi (GSH-Px) è stata misurata spettrofotometricamente e la perossidazione lipidica è stata determinata attraverso il metodo TBA (acido tiobarbiturico). I livelli di glutatione intracellulare sono stati determinati attraverso HPLC.
Risultati. I risultati riporati mostrano che il sodio selenito inibisce gli effetti pro-ossidanti e proapoptotici indotti dal DHA.Conclusioni. Questo studio suggerisce che il sodio selenito, a basse concentrazioni, è in grado di inibire la riduzione del GSH; questo dà un’importante indicazione per lo studio di una nuova proprietà funzionale del Se. Inoltre i nostri dati sperimentali indicano che il sodio selenito interferisce con le azioni pro-ossidanti e pro-apoptotiche del DHA, il quale è considerato un potenziale adiuvante nel trattamento del cancro.

Abstract

Aim of the Study. Considering that the possible interactions between selenium (Se) and docosahexaenoic acid (DHA) in regulating various physiopathological responses in cancer cell lines have not been elucidated and defined yet, the aim of this work was to investigate the effects of the co-treatment of DHA with Se on cellular redox state, apoptosis induction and glutathione content in human pancreatic PaCa-44 cancer cells line.
Methods. The human PaCa-44 pancreatic adenocarcinoma cell line was treated with docosahexaenoic acid or arachidonic acid (ARA), alone or in co-cultures with sodium selenite (Na2SeO3). After treatments cell viability was analyzed by Trypan blue dye exclusion assay and apoptosis was evaluated by Annexin V/FITC kit. Moreover cellular oxidative status was assessed measuring the levels of ROS by cell-permeable 2’,7’-dichlorofluorescein diacetate (DCFH-DA), the glutathione peroxidase (GSHPx) activity by spectrophotometric analysis and lipid peroxidation by TBA-method. The intracellular glutathione level was determined by HPLC.
Results. The results herein reported show that sodium selenite inhibits both the pro-oxidant and the pro-apoptotic effects induced by DHA.
Conclusion. This study suggests that sodium selenite, is able to inhibit the GSH reduction and this gives an important indication for the study of a new functional property of Se. Moreover our experimental results indicated that sodium selenite interferes with the pro-oxidant and pro-apoptotic actions of DHA, which is considered as a potential adjuvant in the treatment of cancer.

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